WB實驗代測的原理及基本過程

更新時間：2020-02-19

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　　Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。

　　一：WB實驗代測原理：

　　1、WB實驗代測采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。

　　2、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

　　以上是小編為大家講解的原理，那么小編接下來進一步講解基本過程有哪些？

　　二：WB實驗代測基本過程：

　　1、獲取細胞或組織裂解物。

　　2、根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer。

　　3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準確性。

　　4、蛋白定量。

　　5、電泳分離蛋白質(zhì)。

　　6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。

　　7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點，降低背景。

　　2、一抗孵育。

　　以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容，希望對大家有所幫助。

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WB實驗代測的原理及基本過程