一、
實時熒光定量PCR檢測服務的用途：
1、基因表達研究：對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測，其結(jié)果特異性強、定量準確，為了解β地中海貧血的分子病理機制及其研究診斷提供了可靠的檢測數(shù)據(jù)。
2、轉(zhuǎn)基因研究：利用兩種發(fā)光探針及適當?shù)难h(huán)閾值，擴增一個轉(zhuǎn)移后的基因和一個對照基因，以分析轉(zhuǎn)基因老鼠接合性。
3、該方法為多個轉(zhuǎn)基因動物的同型結(jié)合及異質(zhì)結(jié)合提供了明確的鑒定結(jié)果。通過實時定量PCR檢測，同型結(jié)合的異質(zhì)接合動物交配后其子代中轉(zhuǎn)基因的傳遞情況符合孟德爾遺傳規(guī)律。
4、這項技術(shù)在轉(zhuǎn)基因動物繁育及基因劑量功能效應實驗中將有很大的用途。
5、單核苷酸多態(tài)性及突變分析：實時熒光定量PCR一個誘人的應用前景是用于檢測基于兩條探針和基因組的不穩(wěn)定性。
6、基因突變基于兩條探針，一條探針橫跨突變點，另一條為錨定探針，與無突變位點的靶序列雜交。兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團標記。
7、如靶序列中無突變，探針雜交便*配對，如有突變，則探針與靶序列不*配對，會降低雜交體得穩(wěn)定性，從而降低其熔解溫度。這樣便可對突變和多態(tài)性進行分析。
二、實時熒光定量PCR檢測服務的常見問題：
1、引物或探針降解：可通過PAGE電泳檢測其完整性。
2、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的濃度做起。
3、模板降解：避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況。
4、擴增效率低:反應條件不夠優(yōu)化，設(shè)計更好的引物或探針、改用三步法進行反應、適當降低退火溫度、增加鎂離子濃度等。
5、PCR各種反應成分的降解或加樣量不足。
6、PCR產(chǎn)物太長：一般采用標準的產(chǎn)物長度。
7、加樣存在誤差：使得標準品不呈梯度。
8、標準品出現(xiàn)降解：應避免標準品反復凍融，或重新制備并稀釋標準品。
9、引物或探針不佳：重新設(shè)計更好的引物和探針。
10、模板中存在抑制物，或模板濃度過高。
11、引物設(shè)計不夠優(yōu)化：應避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。
12、引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。
13、鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。
14、模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設(shè)計避免非特異擴增。
總結(jié)：實時熒光定量PCR檢測服務的用途及常見問題小編就分享到這了，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧！總的來說，希望對大家有所幫助。
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更新時間：2020-12-22 
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