明膠酶譜法MMP-2&MMP-9檢測試劑盒檢驗原理

信帆生物主營產品: 質控品，干擾物質，抗體抗原，elisa試劑盒，動物血制品，生化試劑盒等。實驗代做服務：HE染色/特殊染色/技術服務、免疫組化實驗服務、Western blotting實驗服務、RT-PCR實驗技術服務,QPCR(熒光定量PCR）、酶聯免疫ELISA、生化測試、液相氣相檢測等。

簡介：

基質金屬蛋白酶 (MMP) 屬于金屬蛋白酶家族，該家族由至少 20 個成員組成，并且已知參與細胞外基質蛋白的代謝。基質金屬蛋白酶是一類活性依托鋅、鈣離子發揮作用的蛋白水解酶，在生物體內分布廣泛。這類酶核心作用為分解代謝細胞外基質物質，深度參與胚胎生長發育、機體組織修復、創面愈合以及血管新生等生理活動，保障機體組織形態與結構維持正常狀態。該物質的活性水平處于動態調控之中，一旦表達量與活性出現異常紊亂，就會損傷組織固有屏障。其功能失調和腫瘤侵襲轉移、關節病變、血管硬化、器官纖維化等諸多病癥息息相關，酶與體內抑制物質相互制衡，共同守護機體生理運作平衡。MMP 可通過酶譜法廣泛檢測。本試劑盒提供了一個簡單的酶譜電泳系統，用于檢測血液、體液、分泌物、細胞裂解液、細胞培養基等樣品中的MMP2,MMP9酶譜及活性。

檢驗原理：

本方法借助 SDS - 聚丙烯酰胺凝膠電泳聯合凝膠染色技術，能夠同步檢測 MMP-2、MMP-9 活性以及無活性前體酶原譜系，檢測靈敏度可達nM級別，檢測性能優于 ELISA 檢測方式。

實驗預先制備混合明膠底物的電泳凝膠，將待測生物樣本加入凝膠體系完成電泳分離。電泳體系內的SDS可與基質金屬蛋白酶可逆結合，破壞蛋白空間構象，暫時抑制酶的水解活性，保障蛋白依據分子量差異完成有效分離。電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer孵育，MMP恢復活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。